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细胞增殖检测的Z准确方法
更新时间:2015-05-21   点击次数:1272次

直接测定DNA合成是细胞增殖检测的zui准确方法之一,是测定物质毒性、评估药物安全评价、细胞健康的基本方法,其中以前常用的方式是利用胸腺嘧啶核苷酸类似物——BrdU进行检测。因为在细胞周期的S期,和细胞一起孵育的BrdU能渗入DNA分子中,再结合BrdU抗体与渗入DNA的BrdU特异性结合,就能够检测到DNA复制活跃的细胞。  
但BrdU有一大缺点,就是需要变性DNA后才能与抗体结合,但这就破坏了DNA双链结构,影响了其他染料的结合染色,导致染色弥散,准确性降低等问题。哈佛大学医学院细胞生物学家Adrian Salic就认为:“为了能够暴露BrdU的抗原表位,必须用高浓度的盐酸,乙酸或酶解,但经历了如此严重的处理后,细胞原本精巧细致的结构在显微镜下就变得惨不忍睹了。"  
事实上,现在有一种新的检测方法能避免这种情况的发生——EdU检测。EdU (5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷)也是一种胸腺嘧啶核苷类似物,但其连有的炔羟基团在天然化合物中很少见,在细胞增殖时能够插入正在复制的DNA分子中,基于EdU与染料的共轭反应可以进行快速的细胞增殖检测分析,可以有效地检测处于S期的细胞百分数。

BrdU 需要DNA 变性后才能与抗体结合,导致BrdU、Hoechst 染色弥散,边缘模糊不清;  
而EdU 边缘清晰完整,检测更灵敏、更准确EdU可以检测新合成的DNA,而EU则可以检测新合成的RNA。EU是一种尿嘧啶核苷类似物,能够在RNA转录时期代替尿嘧啶( U )渗入正在合成的RNA分子,基于EU与Apollo?荧光染料的特异性反应进行RNA检测。EU能够在体内和体外水平检测时间和空间上RNA合成的变化,能够更方便地研究RNA转录位点,结合相关抗体标记能够检测与RNA有相互作用的蛋白。结合EdU和EU进行检测新合成的DNA和新合成的RNA,可以深入开展细胞增殖、细胞周期、细胞毒性、DNA复制及修复、信号通路等方面的研究。 

 

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