1.二抗与组织中的Ig结合
如羊抗兔的二抗,二抗可以标本中(人)Ig发生交叉反应,科学上越接近的动物,交叉反应越明显,如人与猴,兔与豚鼠。抗体
避免方法:用与待测组织相同的5%的正常血清稀释二抗。如人血清。
组织中残存醛基与Ig的结合
如醛类固定后未能*的冲洗,残留醛基可以和Ig结合。
2.避免方法:
(1)*冲洗;
(2)0.02%的新鲜的硼氧化钾液处理10分钟后冲洗。
3.内源性过氧化物酶
红细胞,粒细胞的含量尤其高,镜下可以识别,不要将其当成阳性结果。
避免方法:
(1)石蜡切片 0.3%双氧水-甲醇溶液处理切片;
(2)冰冻切片 3%双氧水处理切片5分钟(99:1)因为未经固定包埋,大部分酶未被破坏;
(3)对于骨髓涂片 用非过氧化物酶标记的抗体
4.内源性生物素
以 24mg/ml的卵白素封片15分钟。
5.交叉反应
PcAb敏感性高,但特异性稍低,容易出现非特异性染色。
避免方法:
(1)尽可能稀释抗体;
(2)尽可能用McAb。