染色结果的观察
1、阳性结果应定位在细胞相应的部位,在细胞膜表达的抗原阳性结果应定位在细胞膜上,在其他部位的阳性反应均为非特异性染色。不当的抗原修复会导致抗原在组织细胞中定位的改变。根据所检测抗原的不同,抗原分别定位在:
(1)细胞膜:如LCA和CD3、CD20等;
(2)细胞质:如Cytokeratin 、GFAP、S100 、CgA、AFP等;
(3)细胞核:如Ki-67、ER、PR、TTF-1、HPV-Ag、Cyclin D1、TDT等。
2、组织的周边、气泡、刀痕、皱折等部位往往呈现非特异性阳性表达。
3、染色结果呈阴性并非都是抗原不表达,要考虑是否与组织中的抗原受到破坏有关。
4、组织切片背景深与下列因素有关:
(1)石蜡切片脱蜡不干净;
(2)*抗体浓度过高或孵育时间过长,温度过高;
(3)显色剂DAB浓度过高或H2O2太多;细胞
(4)抗体不纯;
(5)抗体孵育后切片清洗不干净。