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检测细胞凋亡
更新时间:2016-04-01   点击次数:843次

          Annexin V是检测细胞凋亡的灵敏指标之一。在细胞发生凋亡时,细胞膜上的磷脂酰丝氨酸(PS)由质膜内侧翻向外侧,而Annexin V与PS有高度的亲和力,可以与暴露在细胞外侧的PS结合。在细胞发生凋亡时,PS的外翻要早于细胞核的改变,因此与DNA碎片检测比较,使用Annexin V可以更早的检测到细胞的凋亡。但是细胞死亡时也会发生PS的外翻,所以Annexin V常与鉴定细胞死活的核酸染料PI结合使用来区分凋亡细胞(Annexin V+/PI-)和死亡细胞(Annexin V+/PI+)。 

 

操作步骤:

1. 用不含EDTA的0.25%胰酶消化各组细胞,收集后1000rpm离心5min,PBS重悬。
2. PBS将细胞润洗2次,1500rpm离心5min。
3. 各组样品分别依次加入500μL Binding Buffer,5μL Annexin V-FITC,5μL PI,混匀,室温避光反应5~15min。
4. 流式细胞仪上机检测,CELLQuest软件获取和分析实验数据。

 

 

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