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elisa试剂盒白介素类干扰因素的研究
更新时间:2018-02-28   点击次数:1005次

elisa试剂盒白介素类应用价值。
(2)改变酶标抗体:由于RF结合的是IgG的Fc片段,如果将待酶标的抗体的F,片段酶切去除,仅留下具有特异结合功能的F(ab’)2部分标记酶,则在测定中即可避免RF的干扰。
(3)标本中RF用变性IgG预先封闭:将经热变性(63℃,10 min)的动物如兔、羊等的IgG加入到标本稀释液中,或是将该变性IgG连接至一颗粒固相如聚苯乙烯微球或微孔,然后加入临床血清标本,反应后,再吸出标本进行检测。此外,在测定特异IgM时,也可使用抗人IgG去除临床标本中RF和IgG。
(4)测定抗原时,可在标本中加入可使RF降解的还原剂:如2—巯基乙醇。2—巯基乙醇等还原剂可使抗体内的巯基裂解,因而可以去除RF的干扰,但只适用于抗原测定。
(5)包被或酶标二抗使用特异的鸡抗体IgY:RF不与鸡IgY反应,如果包被和酶标二抗均为鸡IgY抗体,则不受标本中RF的干扰。
2.补体 在固相酶免疫测定中,来自哺乳动物的固相特异抗体和酶标二抗均有激活人补体系统的功能。一方面,固相抗体和酶标二抗可因为其在固相吸附及结合过程中,抗体分子发生变构,从而其F,段的补体C1,结合位点被暴露出来,这样C1,就成为一个中介物将二者交联起来,从而出现假阳性结果。另一方面,固相抗体也会因为活化补体的结合,封闭抗体的抗原表位结合能力,而引起假阴性结果或使定量测定结果偏低。由补体引起的干扰可通过下述方法避免:
(1)对临床血清标本加热灭活补体:采用56~C30 min加热可使标本中的补体C1。灭活。
(2)包被或酶标二抗使用特异的鸡抗体:鸡抗体不激活人的补体系统,因此,使用特异的鸡抗体,不会出现因补体激活而存在的假阳性和假阴性干扰。
3.异嗜性抗体(heterophilieantibodies) 人类血清中含有抗啮齿类动物(如鼠、马、羊等)
的免疫球蛋白(1g)的抗体,即天然的异嗜性抗体。有研究表明,天然的异嗜性抗体(1gG)可分为两类,一类(85%的假阳性由其引起)可结合于山羊、小鼠、大鼠、马和牛IgG的Fab区域,但不与兔IgG的Fab区结合。另一类(15%的假阳性由其引起)可结合于小鼠、马、牛和兔IgG的Fc区表位,但不与山羊和大鼠IgG的Pc区表位结合。异嗜性抗体可通过交联固相和酶标的单抗或多抗而出现假阳性反应。由异嗜性抗体引起的干扰可通过下述方法避免:
(1)使用特异的兔F(ab’)2。片段作为固相或测定酶标抗体。
(2)在标本或标本稀释液中加入过量的动物Ig,封闭可能存在的异嗜性抗体。但加入量不足或亚类不同时无效。
(3)使用靶特异的非Ig亲和蛋白(affibody)替代固相或酶标抗体之一。采用噬菌体展示技术展示来自单个金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)联合文库的人IgA结合亲和蛋白,用于IgA的测定,不受异嗜性抗体的影响。
(4)使用elisa试剂盒白介素类特异的鸡抗体作为固相和测定抗体。
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